De la debutul pandemiei COVID-19, cel mai recomandat test pentru a depista persoanele infectate cu noul coronavirus este Real Time RT-PCR (real time reverse transcription–polymerase chain reaction, ceea ce înseamnă reacție de polimerizare în lanț cu transcripție inversă în timp real). Acesta este una dintre cele mai rapide și precise metode pentru depistarea, urmărirea și studierea virusului SARS-CoV-2. Urmărește în continuare ce este mai exact acest test, cum funcționează și cum trebuie să te pregătești de efectuarea lui.
Ce reprezintă testul RT-PCR în timp real?
Testul reprezintă o metodă de depistare a prezenței materialului genetic specific al unui agent patogen, inclusiv al virusului SARS-CoV-2, în probele colectate de la pacient. Pentru a depista materialul genetic necesar, acesta se marchează cu coloranți fluorescenți specifici. Această tehnică permite specialiștilor să vizualizeze particulele la sfârșitul procesului de marcare.
Află care este scopul testelor rapide și lente în gestionarea pandemiei.
Ce este virusul și materialul genetic?
Virusul este un „pachet” microscopic de material genetic înconjurat de un înveliș molecular. Materialul genetic poate fi acidul dezoxiribonucleic (ADN) sau acidul ribonucleic (ARN).
ADN-ul este o moleculă cu două catene care se regăsește în celulele tuturor organismelor, precum cele ale oamenilor, animalelor, plantelor și virusurilor și păstrează în sine codul genetic sau modul în care aceste organisme sunt formate și funcționează.
ARN-ul este o moleculă cu o catenă care copie, transcrie și transmite anumite părți ale codului genetic proteinelor, astfel încât acestea să se formeze și să își exercite funcțiile care mențin organismele în viață. Pentru a copia, transcrie și transmite informația sunt antrenate diferite tipuri de ARN.
Virusul SARS-CoV-2 care provoacă COVID-19 conține ARN, ceea ce înseamnă că pentru a supraviețui, acesta trebuie să pătrundă în celulele umane sănătoase și să se înmulțească. Odată pătrunse în celule, virusurile le reprogramează și le transformă în „fabrici de producere a noilor virusuri”.
Pentru a detecta virusul din celule, la etapele inițiale, cercetătorii trebuie să transforme ARN-ul viral în ADN. Anume acest proces este denumit „transcripție inversă”. Acest lucru se face, deoarece doar particulele de ADN pot fi multiplicate, iar procesul este crucial pentru a depista cu precizie virusul SARS-CoV-2.
Procesul de multiplicare (amplificare) este deosebit de important, deoarece în loc să depisteze doar o parte mică a virusului, specialiștii obțin într-un timp scurt suficient ADN pentru a confirma cu exactitate dacă acesta este sau nu prezent în organism.
Cum funcționează RT-PCR pentru a depista virusul care provoacă COVID-19?
Totul începe cu colectarea materialului din zonele cele mai frecvent populate de virus – nas și gât. Tampoanele naso-faringiene (din nas) și oro-faringiene (din gât), iar în unele cazuri sputa sau materialul pulmonar obținut prin proceduri instrumentale (aspirat, lavaj) sunt tratate cu câteva reactive chimice care înlătură substanțele precum proteinele și grăsimile virale și extrag doar materialul genetic al virusului (ARN-ul). Acest mixaj de ARN este o combinație dintre materialul genetic al persoanei testate și, în cazul în care este prezent, al virusului ce urmează a fi depistat.
La următoarea etapă, cu ajutorul unei enzime specifice, ARN-ul viral este transformat în ADN. Ulterior, la amestecul obținut specialiștii adaugă particule de ADN ale virusului care provoacă COVID-19. Dacă virusul este prezent în probă, aceste particule adăugate se atașează în mod complementar, prestabilit, de cele existente, inclusiv pentru a marca specific particulele existente și a depista mai târziu prezența virusului.
Proba obținută este plasată ulterior în aparatul RT-PCR, iar acesta creează toate condițiile necesare pentru a obține la final mai multe copii ale ADN-ului viral marcat. Fiecare ciclu al aparatului dublează numărul copiilor virale. În medie, sunt petrecute 35 de cicluri, ceea ce înseamnă că la final sunt obținute peste 35 de miliarde ale ADN-ului viral marcat pentru fiecare particulă de virus prezentă în proba colectată.
Pe măsură ce tot mai multe copii ale ADN-ului viral sunt generate, etichetele markerului se atașează de secvențele ADN-ului și eliberează un colorant fluorescent care este măsurat de computerul mașinii și prezentat în timp real pe ecran. Cantitatea de colorant fluorescent este măsurat după fiecare ciclu. Atunci când se depistează o anumită cantitate, acest lucru confirmă prezența virusului.
Numărul ciclurilor necesare pentru a obține un nivel anumit de fluorescență este monitorizat de specialiști. Cu cât mai puține cicluri sunt necesare, cu atât mai severă este infecția virală.
Cât timp durează efectuarea testului?
În general, testul RT-PCR este realizat în timp real, cu obținerea rezultatului în mai puțin de 3 ore, deși laboratoarele au de obicei nevoie de 6-8 ore pentru a le livra.
Când trebuie realizat testul RT-PCR?
Este foarte important să știți că testul RT-PCR nu este util pentru a depista infecția din trecut, ci doar pe cea curentă, într-un interval de timp bine stabilit.
Luând în considerare faptul că perioada de incubație a virusului COVID-19 este estimată între 2-14 zile, iar potrivit raportului China Medical Treatment Expert Group for Covid-19, publicat în The New England Journal of Medicine pe 28 februarie 2020, diagnosticul prin metoda RT-PCR este recomandat să fie făcut începând cu ziua a 4-a de la infectare.
În acest sens, toți cei care solicită această analiză, sunt obligați să se asigure de prezența simptomelor și recomandarea medicului pentru a fi investigați sau a termenului de cel puțin 3-4 zile de la contactul cu o persoană suspectată de COVID-19 sau la întoarcerea din țările cu zone de risc crescut.
Cum trebuie să te pregătești pentru efectuarea testului?
Laboratoarele care efectuează testul în țara noastră recomandă efectuarea testului dis-de-dimineață, imediat după un somn de noapte. Este recomandat să nu clătești gura.
Cu 4-5 ore înainte de preluarea probei din gură trebuie să nu mănânci, să nu bei, să nu te speli pe dinți, să nu mesteci guma, să nu clătești gura și să nu fumezi sau să consumi alcool.
Cu 4-5 ore înainte de colectarea probei din nas trebuie să nu îți administrezi picături sau spray-uri și să nu clătești nasul.
Sănătate să aveți!
iaea.org, invitro.md, nejm.org
